酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的高灵敏度检测方法，能够在荧光免疫细胞化学(ICC)，免疫组化(IHC)和原位杂交(FISH)等多个应用场景中实现荧光信号放大，检测到传统方法无法检出的低丰度靶标。偶联有辣根过氧化物酶 HRP 的二抗与一抗结合后，将邻近区域的荧光染料分子的酪胺基团活化；活化后的染料分子可与靶标分子及靶标分子周围的芳香类氨 基酸残基 (如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等) 共价结合并聚集沉积，在靶标分子处形成高密度荧光信号区域，从而将检测信号放大，实现对低丰度靶标分子的检测与成像。
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FAQ（经常问到的一些问题）：
1. 问：为什么会串色？
答：串色与多种因素有关系：A 可能与成像设备滤光片带宽有关系，尽量选用窄波长带宽的滤光片；B 可 能与上一轮抗体未被完全洗脱关系，对于一些亲和力比较高的抗体比如 CK 等，抗体洗脱条件需要延长（提 高洗脱温度 时间等）；C 可能与信号不平衡有关系，比如相邻两个通道染料，一个强度过高，一个过低，导致强的信号发生外溢；D 其他可能存在的原因，比如抗体弄混，下一轮抗体忘记洗脱/修复等。
2. 问：WH-xxxPlus 荧光染料与 TSA buffer 稀释比例怎样优化？
答：本试剂盒灵敏度比较高，是常规 TSA 试剂盒的 10-50 倍，注意信号不要过强；信号过强 则降低染料 浓度/反应时间/一抗浓度，信号过低 提高染料浓度/反应时间/一抗浓度；本试剂盒的特点，浓度越高，将成指数倍增强信号；1:50 能获得最强信号，1:500 相当于常规 TSA 信号。
3. 问：抗原修复方式/抗体洗脱方式怎么选择？
答：建议第一轮抗原修复 9.0 EDTA,95 度 15-25min；第二轮或以上抗体洗脱/抗原修复，建议柠檬酸 6.0 95 度 25min-40min ，针对一些容易掉片的组织，抗体洗脱可以采用抗体洗脱液（我司有卖：mIHC 专用抗体洗脱液），抗体洗脱液时间过长可能会导致抗原识别降低/dapi 核弱染，注意把控抗体洗脱液时间（ 一般室温 或者 37 度 5- 15min ，1-2 次能到到比较理想的结果）。
4. 问：染料是否需要避光？
答：本试剂盒荧光染料抗淬灭性强，全程无需日光灯下避光，使用过程中也无需在暗环境中操作但不能在太阳光下照射。
5. 问：做多标时，指标/抗体顺序如何选择？
答：难以洗脱的抗体，摆在最后一轮，不然容易串色，比较难做的指标放在前面几轮做（比如 foxp3）， 第一轮通常做适合 EDTA 9.0 修复的指标；根据我司经验，第一轮通常采用 EDTA 9.0/高压 6.0 第二轮及其以上通常采用 6.0 ，多抗建议 6.0 。
6. 问：为什么有时候有非特异性或者非特异是怎么产生的以及怎样改善？
答：非特异的产生有几种可能，A：抗体是多克隆的，容易产生非特异，可以换用单克隆抗体或者降低浓 度以及修复强度来改善；B:信号放大过强，可以降低染液反应时间或者浓度；C：一抗浓度过高或者修复过度，采用比较低的稀释抗体比例，或降低修复强度（温度或者时间或者修复液 PH）。
7. 问：做石蜡切片 mIHC,抗体应该怎样选择？
答：尽量选用单克隆抗体，抗体应用选用 IHC /mIHC/ IHC-P,优先选用经过敲除验证的抗体等。
8. 问：本试剂盒对于其他进口/国产试剂盒优势在哪里？
答： A：超高的性价比，其他品牌试剂盒动辄过万，我司试剂盒价格在 2k- 1w 之间；
B： 稳定性好：即使 试剂盒不小心被放在常温，也能在一个月的放置后，可以继续使用 以及检测信号灵敏度无差异，威奥生物开发的此款试剂盒，采用了最新配方，有各种保护剂
/防腐剂/H2 O2 稳定剂等成分，极大提高了试剂盒稳定性；
C ：超高灵敏度：最高灵敏度可以达到市场其他公司的 10-50 倍。