检测意义:
还原型谷胱甘肽(Glutathione),化学名称为N-(N-L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨酰基)甘氨酸,分子式为C10H17N3O6S,分子量为307.33,它溶于水、稀醇、液氨和甲基甲酰胺,而不溶于醇、醚和丙酮。
谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽,由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成,存在于几乎身体的每一个细胞 。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能,并具有抗氧化作用、整合解毒作用 。半胱氨酸上的巯基为其活性基团(故常简写为G-SH),易与某些药物、毒素等结合,使其具有整合解毒作用 。谷胱甘肽不仅可用于药物,更可作为功能性食品的基料,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽有还原型(G-SH)和氧化型(G-S-S-G)两种形式,在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多数。
试剂盒组分: (保存温度4℃)
名 称 | 规格(48 T) | 规格(96 T) |
微孔板 | 1/块 | 1/块 |
标准品(5mg/ml) | 1支 | 1支 |
标准品/样品稀释液(10×) | 10ml | 10ml |
提取液 | 6ml | 12ml |
显色液 | 25ml | 50ml |
产品说明书 | 1份 | 1份 |
本试剂盒适用于动物体液、植物/动物组织匀浆等。
标本收集与试剂准备:
1. 血清、血浆样本收集:应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,高血脂标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。细胞培养液、上清样品收集:取细胞培养上清液500ul,4度,6000rpm离心5-10min;取上清。 组织样品收集:将组织块用PBS漂洗干净,制成匀浆液,4 度离心(3500r/min, 30min) 取上清液。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
2. 标准品/样品稀释液(1×)的配置:1ml标准品/样品稀释液(10×)+9ml去离子水。
3. 标准品配制:取8个1.5ml离心管,分别标注S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7, blank,每管中各加入标准品/样品稀释液(1×)100ul,第一管S1中再加入标准品(5mg/ml)100ul,置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸100ul,移至第二管,如此反复作对倍稀释,从第七管(S7)中吸出100ul弃去,第八管为空白对照。标准曲线浓度为: 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39、0 ug/ml。
4. 样品的准备:取和检测样品相同数量的1.5ml离心管并编号,每管中分别加入对应检测样品100ul。
5. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。
检测程序:
1. 加提取液:将配置/分装好的标准品及待测样品放入1.5ml离心管架(1.5ml双面板)上,每管中分别各
加入提取液100ul,震荡混匀后,室温静置10分钟。
2. 加显色液:每孔加入显色液400ul,混匀后室温静置反应10分钟。
3. 读 数:将反应好的样品,8000转离心1分钟,取上清100ul对应加入微孔板中,(如检测样品澄清
则可以不离心)30分钟内用酶标仪在412nm处读OD值。
结果判断与计算:
1. 所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算,如空白孔OD低于0.1,也可以直接计算。
2. 以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘以稀释倍数即可。
注意事项
1. 请自备1.5ml离心管及离心管架等常规检测设备及仪器。
2. 检测时所有试剂都要恢复到室温,试剂盒开封后剩余试剂放回袋中1 个月内用完。
3. 实验前请认真仔细阅读此说明书,说明书以试剂盒内纸质版为准。
4. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!