焦磷酸测序(甲基化检测)(包售后)
检测特定基因甲基化状态的“金标准”还是焦磷酸测序(Pyrosequencing)。先用重亚硫酸盐转化,随后进行焦磷酸测序。
焦磷酸测序介绍
本实验室产品有Qiagen公司Q48焦磷酸测序仪(可检测100bp左右的长度),高度精确的甲基化定量分析和精准SNP分析,适用于各种研究领域,包括癌症和表观遗传学研究
1、DNA甲基化检测(m5C突变型)
n 读长:可长至100bp
n 检测范围:能够检测更多特殊结构(如GC含量,重复、发夹)
n 流程简洁:不用构建克隆,直接测序(等于将全部克隆子全测了计算甲基化率)
n 灵敏度高:是DNA甲基化检测的金标准
2、snp检测(单碱基或者多碱基突变都可)
n 微量上样 :珍贵样品,上样量仅需Q96的25%
n 低频突变 :可检测3%左右的低频突变
介绍:焦磷酸测序(Pyrosequencing)技术是由4种酶(DNA 聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)、荧光素酶(luciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase))催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。
n全套试剂均用Qiagen,保证质量稳定
n定量分析癌症相关基因的突变
n 定量分析单个和多个CPG位点
n 确定特定区域的CPG 甲基化状况
n序列背景提供内置的分析参照
n后续分析简洁灵活
nDNA亚硫酸盐处理
n 产物回收
n PCR扩增(1条修饰引物+1条普通扩增引物)
n焦磷酸测序(1条普通测序引物)
n后续数据分析
1、目的序列
n提供原始序列并标记出目的序列(黄色)
n 重点区域请加粗、CG位点请加双下划线(红色)
n请告知每段序列在费用上可承受几个反应(比如这段序列很长,但经费预算只能做一个反应,我们就会把这个反应尽可能的集中在最重要的部分)
n 由于引物不能含有CG位点(CG位点的甲基化会影响扩增效率),所以引物设计的位置是有限制的,不是每个地方都能设计引物。
2、样品要求
n DNA或者血液、组织等 (DNA浓度达到30ng/ul,纯度为1.8左右,量达到30ul,具体还得看反应个数)
1、结题报告
2、原始数据