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防脱玻片|BCA试剂盒|ECL发光液|RIPA裂解液|4%多聚甲醛|上海威奥生物科技有限公司
    RIPA裂解液(强) 
    产品编号  产品名称                  包装 
    WB0101  RIPA裂解液(强) 100ml 
    产品简介: 
    1. 我们生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液
    裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。 
    2. RIPA即Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强
    度大致可以分为强、中、弱三类。 
    3. RIPA裂解液(强)的主要成分为SDS、NP-40 、sodium deoxycholate 及aprotinin等多种蛋白酶
    抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。 
    4. 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒
    (WB0123/WB0124/ WB0125/ WB0126)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用
    Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 
    包装清单: 
    产品编号 产品名称                  包装 
    WB0101 RIPA裂解液(强) 100ml 
    — 说明书 1份 
    保存:4℃保存,一年有效。 
    使用方法: 
    对于培养细胞样品: 
    1. 取适当量的RIPA 裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF(货号 WB0114),使 PMSF 的最终
    浓度为 1mM。 
    2. 对于贴壁细胞,去除培养液用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍,加入适量裂解液,用
    枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触,轻轻的摇晃约 5-10 分钟,充分裂解后,10000-14000g
    离心 10 分钟,取上清,即可进行后续操作。 
    裂解液用量说明: 用于不同规格标准培养板裂解液容量 
    板规格/表面积 试剂容量 
    100mm 500-1000μι 
    60mm 250-500μι 
    6-well plate 200-400μιper well 
    24-well plate 100-200μιper well 
    96-well plate 50-100μιper well  
    3. 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍,加入适量裂解液,
    用枪吹打把细胞吹散,用手指轻弹或旋涡震荡 5-10 分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明
    显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解,充分裂解后,10000-14000g 离心 10 分
    钟,取上清,即可进行后续操作。 
    对于组织样品: 
    1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后
    切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。 
    2. 取适当量的RIPA 裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使 PMSF 的最终浓度为1mM。 
    3. 按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10 的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不
    充分可以适当添加更多的裂解液, 如果需要高浓度的蛋白样品, 可以适当减少裂解液的用量) 。 
    4. 用匀浆器匀浆,直至充分裂解。 
    5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3- 5 分钟,取上清,即可进行后续作。 
    注:RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含
    有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心
    取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打
    散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如
    NF-kappaB、p53 等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
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